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談?wù)凟LISA實驗中關(guān)于跳孔的疑問及解決方法

更新時間:2021-08-10      瀏覽次數(shù):914
  今天小編給大家講講ELISA實驗中關(guān)于跳孔的疑問及解決方法:
 
  問:我剛配置試劑的時候中斷了,這是否會影響我的實驗結(jié)果?
 
  答:這可能會導(dǎo)致產(chǎn)生波動的曲線。在移液之前確定所有的標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品是否配制完好。請在試劑配制完的15-20分鐘內(nèi)滴加入板內(nèi)。(除非特別說明)
 
  問:我是否需要一個多道移液器?
 
  答:在配制諸如底物,酶結(jié)合物,或者稀釋液的時候,最好選擇連續(xù)或多道移液器。
 
  問:如果我沒有平衡試劑會怎樣?
 
  答:沒有平衡的試劑會導(dǎo)致孔之間溫度不均,使整個酶標(biāo)板的信號產(chǎn)生變異。除非特別說明,試劑一般在使用之前都要平衡至室溫。
 
  每次檢測都會有推薦的孵育時間和溫度。冷凍的試劑一般需要更長的孵育、間。所以最好使用說明書上推薦的孵育溫度和時間。
 
  問:我是否需要蓋板?
 
  答:參看試劑盒內(nèi)說明書。如果說明書內(nèi)的實驗步驟中有推薦使用蓋板,則在使用時應(yīng)選用與酶標(biāo)板配套的蓋板,使邊緣與酶標(biāo)板緊密契合。如果蓋板的一邊突起,則會產(chǎn)生信號的差別。
 
  問:酶標(biāo)儀的設(shè)置怎樣影響我的結(jié)果?
 
  答:對于底物測定,如果讀數(shù)時間等于或超過2秒/孔,使從第一孔到最后一孔在讀書時存在時間上的延誤,會導(dǎo)致結(jié)果的異變。在底物反應(yīng)階段,辣根過氧化物酶會一直作用直到底物反應(yīng)*。而由于時間的延誤,底物越來越少,底物反應(yīng)也受到影響。將酶標(biāo)儀的讀數(shù)時間設(shè)定為1.0秒/孔。
 
  問:我是否可以根據(jù)自己的方案來調(diào)整孵育時間?
 
  答:更改孵育時間或溫度會導(dǎo)致檢測不能達(dá)到平衡或過度反應(yīng)。請按照說明書推薦的孵育時間和溫度操作。如果同時進(jìn)行多項檢測,對每孔必需分別計時已避免孵育不足或過度孵育。
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